สารออกฤทธิ์ของยาเบื่อหนูโบรมาดิโอการ์ด คือโบรมาดิโอโลน(Bromadiolone) 0.005% เป็นสารกลุ่มใหม่ คือกลุ่มแอนติโกลคูแล้นท์ รุ่นที่ 2 (Anticoagulant) สารออกฤทธิ์โบรมาดิโอโลนนี้ทำให้หนูไม่เข็ดขยาดเหยื่อ ต่างจากยาเบื่อหนูตามท้องตลาดที่ทำให้หนูเกิดการเรียนรู้จึงเกิดการเข็ดขยาด โดยการออกฤทธิ์ของโบรมาดิโอโลนจะเริ่มออกฤทธิ์หลังจากหนูกินเหยื่อเข้าไปแล้ว 3-5 วัน เพียงแค่หนูกินยาเบื่อโบรมาดิโอการ์ดและได้รับสารโบรมาดิโอโลนในครั้งเดียว สารจะเข้าไปทำปฏิกิริยากับร่างกายหนูทำให้อวัยวะภายในมีเลือดออก หนูจะเริ่มผอมลงเนื่องจากการสูญเสียเลือดและน้ำ ดังนั้นหนูจะเริ่มแสดงอาการป่วย คือ การหยุดกินอาหาร จนทำให้ตัวหนูผอมแห้งและตายในที่สุด